Persistance du virus Ebola chez les survivants masculins

Nous avons étudié la durée du virus Ebola EBOV ARN et infectieux EBOV dans des échantillons de sperme de virus Ebola survivants EVD EBOV ARN et EBOV infectieux a été détectée par RT-PCR en temps réel et la culture de virus sur des jours et des jours, respectivement, après le début de l’EVD

Récemment, des preuves moléculaires de transmission sexuelle du virus Ebola EBOV d’un homme ayant survécu à la maladie à virus Ebola Ebola à une partenaire féminine apparue quelques jours après l’apparition de la maladie à virus Ebola ont été rapportées au Liberia Un échantillon de sperme du survivant collecté L’observation du virus a été négative cognitif. Ce cas souligne l’urgence de comprendre la persistance du virus EBOV dans le sperme et d’évaluer l’infectiosité potentielle pour informer le risque de transmission du virus EBOV des survivants masculins à leur sexe. Des données limitées provenant de tests de spécimens de sperme collectés auprès d’un petit nombre de survivants de précédentes épidémies de MVE associées à EBOV ont indiqué que l’ARN EBOV peut être détecté jusqu’à plusieurs jours après le début de la maladie. Récemment, la détection de l’ARN EBOV dans le sperme après l’apparition de la maladie Cependant, la plus longue période d’apparition de la maladie Ces données ont révélé qu’il était important d’étudier la durée et l’infectiosité du virus EBOV dans les échantillons de sperme disponibles soumis volontairement par un petit nombre de survivants adultes de sexe masculin. EVD aux États-Unis

Méthodes

Des spécimens de sperme provenant de survivants ayant souffert de maladie modérée à grave avec EVD, qui ont tous reçu des traitements expérimentaux différents en plus d’une prise en charge clinique pendant leur hospitalisation , ont été testés après récupération. après la convalescence de la maladie à virus Ebola dans les centres de contrôle et de prévention des maladies dans le cadre de leur suivi clinique pendant la période de convalescence post-Ebola. Les médecins ont conseillé aux survivants de s’abstenir de rapports sexuels ou d’utiliser des préservatifs jusqu’à épuisement. évidence d ‘EBOV détectée Les spécimens de sperme ont été collectés et transportés dès que possible ou maintenus à des degrés Celsius et expédiés pendant une nuit sur des emballages froids congelés à CDC La majorité des spécimens ont été traités en quelques jours; Quelques échantillons ont été traités – jours après la collecte Un seul spécimen prélevé quelques jours après l’apparition des symptômes a été congelé avant la culture virale. Les spécimens de sperme ont été traités au CDC dans des conditions de biosécurité BSL L’acide nucléique a été extrait et testé par transcription inverse. qRT-PCR pour nucléoprotéine EBOV NP ainsi qu’un gène de contrôle cellulaire interne beta -microglobuline bm Thermo Fisher Scientific, #E Le test NP a une limite de détection estimée de TCID / mL basée sur plusieurs études non publiées et d’une performance similaire profil du test NP EUA http: // wwwfdagov / EmergencyPreparedness / Counterterrorism / MedicalCountermeasures / MCMLegalRegulatoryandPolicyFramework / ucmhtm # ebola Les copies par mL qui correspondent à la charge virale ne peuvent pas être calculées car le test détecte les gènes génomique, antigénomique et ARNm; par conséquent, des contrôles positifs et négatifs sont effectués pour chaque cycle qRT-PCR, mais aucune courbe standard n’est générée. Cycle threshold Ct values ​​& lt; ont été jugés positifs L’interprétation des résultats de qRT-PCR comprend l’analyse des valeurs Ct, des courbes et des résultats bm pour chaque échantillon. Étant donné le type d’échantillon, des études sont en cours pour déterminer la distribution du contrôle interne. virus, isolement de virus de culture cellulaire a été tenté comme décrit précédemment

RÉSULTATS

Les résultats de la détection de l’ARN EBOV dans les spermatozoïdes disponibles au cours du temps sont présentés dans la Figure EBOV L’ARN a été détecté dans le sperme quelques jours après le début des symptômes après le premier résultat négatif. des jours après l’apparition de la maladie EBOV a été isolé à partir de spécimens de sperme collectés chez des survivants et quelques jours après la survenue des premiers jours après le premier résultat négatif du spécimen de sang. Des valeurs de Ct plus élevées indiquent une concentration plus faible de la séquence cible

Figure Vue largeTélécharger la lameNucléoprotéine du virus Ebola NP Réaction quantitative en chaîne par polymérase avec transcription inverse qRT-PCR et résultats d’isolement du virus sur les spermatozoïdes Chaque diamant représente un échantillon de sperme indépendant. Les résultats NP qRT-PCR sont inclus dans les losanges et les rectangles. Les losanges rouges indiquent une tentative d’isolement contaminé et le virus Ebola infectieux n’a pas pu être confirmé. La ligne pointillée noire indique le dernier jour après apparition des symptômes lorsque le virus a été isoléFigure Voir grandTélécharger diapositiveNucléoprotéine du virus Ebola NP Rétraction quantitative polymérase en chaîne qRT-PCR et résultats d’isolement du virus sur les spermatozoïdes Chaque diamant représente un échantillon de sperme indépendant. Les résultats NP qRT-PCR sont inclus dans les diamants et le rectan. Les losanges rouges et noirs représentent l’isolement positif et négatif du virus, respectivement. Les rectangles indiquent qu’aucune tentative d’isolement du virus n’a été tentée. Le losange rouge indique une tentative d’isolement contaminé et le virus Ebola infectieux n’a pas pu être confirmé. ligne pointillée noire signifie le dernier jour après l’apparition des symptômes lorsque le virus a été isolé

DISCUSSION

Nous décrivons la détection de l’ARN EBOV et du virus infectieux dans des échantillons de sperme prélevés chez des patients masculins hospitalisés pour EVD aux Etats-Unis et récupérés. L’ARN EBOV a été détecté quelques jours après l’apparition de la maladie, tandis que le virus EBOV infectieux a été isolé jours après le début de la maladie Ceci est similaire à la période de jours pour isoler le virus infectieux du sperme après le début d’une épidémie de MVE L’infection des testicules par EBOV se produit probablement par virémie pendant la phase aiguë de la MVE. un cas mortel de MVE , et une inflammation a été rapportée avec identification des particules EBOV dans les cellules interstitielles, endothélium et monocytes du tissu testiculaire de primates non humains infectés expérimentalement EBOV dans les testicules peut être protégé de la réponse immunitaire, et donc viral actif la réplication peut continuer pendant des périodes prolongées Beaucoup plus de recherche est nécessaire pour comprendre la pathogenèse et maintien de l’EBOV dans les organes immunocomprimés L’impact de toute thérapeutique expérimentale administrée pendant la prise en charge clinique de la MVE sur la persistance des EBOV dans les testicules pendant la période post-EVD est inconnu, bien que la demi-vie de ces thérapies expérimentales soit loin. Plus récemment, l’OMS et les CDC ont recommandé l’abstinence ou l’utilisation du préservatif pendant au moins des mois après la guérison de la MVE. Basé sur l’incertitude quant à la durée du virus EBOV infectieux dans le sperme. L’OMS recommande maintenant aux survivantes du virus EVD de s’abstenir de rapports sexuels ou de pratiquer des rapports sexuels sans risque avec un usage correct du préservatif jusqu’à ce que le sperme ait été testé deux fois avec un intervalle d’au moins une semaine par RT-. PCR Les informations sur les limites des tests doivent également être discutées lors de la fourniture des résultats. Le CDC recommande que, jusqu’à ce que l’on dispose de plus d’informations sur la persistance du virus EBOV dans le sperme, il convient d’éviter le contact avec le sperme d’un patient atteint de MVE [ ,] Nos résultats sont limités par le petit nombre de spermatozoïdes qui ont été soumis à des tests de dépistage du virus Ebola à différents intervalles de temps. La longévité de la détection de l’EBOV dans le sperme de survivants EVD masculins nécessite une étude approfondie pour déterminer s’il existe une corrélation. entre la détection de l’ARN viral et le virus infectieux Il se peut que des charges virales plus élevées pendant la phase aiguë de la maladie conduisent à une augmentation de l’ensemencement de ces sites privilégiés immunisés et donc à une présence prolongée de EBOV infectieux et non infectieux. pourrait être affectée par plusieurs facteurs tels que le temps de stockage et la température, les facteurs de l’hôte, les champignons ou les bactéries. La transformation de quelques échantillons a été retardée en raison de problèmes de transport, mais même au moment de la collecte, un isolat positif a été obtenu. Le cas de suspicion d’EBOV les jours de transmission sexuelle après l’apparition des symptômes soulèvent quelques questions sur la sensibilité de l’isolement viral , mais comme l’échantillon testé positif par qRT-PCR et négatif par culture virale a été recueilli quelques jours après l’événement de transmission suspecté, il est possible que le virus infectieux En conclusion, les résultats rapportés étayent des données antérieures suggérant la possibilité d’une transmission sexuelle de EBOV par l’exposition du sperme à un partenaire sexuel sensible d’un adolescent ou d’un adulte survivant d’un EVD récupéré au moins Apparition de la maladie EVD Compte tenu du rapport de cas de suspicion de transmission sexuelle EBOV jours af l’apparition de l’EVD , la détection de l’ARN EBOV dans le sperme pendant – mois après le début de l’EVD chez% des survivants dans une étude transversale , et nos résultats, il semble prudent d’adhérer à la recommandation de l’OMS pour les survivants masculins à pratiquer Le conseil de tous les survivants masculins et adolescents adultes et de leurs partenaires sexuels sur la possibilité de transmission sexuelle de l’EBOV par l’exposition au sperme est essentiel Des études épidémiologiques et scientifiques plus larges sont nécessaires. nécessaires pour évaluer le risque de transmission sexuelle de EBOV à partir du sperme ainsi que du liquide vaginal des survivants EVD à leurs partenaires, la conformité avec les recommandations de l’OMS et CDC, et l’efficacité des préservatifs pour réduire la transmission sexuelle de EBOV

Remarques

Remerciements Nous remercions les personnes suivantes pour leurs contributions: David Gilchrist MD, Thomas Greenough MD Université du Massachusetts Medical School, Worcester, Massachusetts; Cynthia Condon, Ph.D., Michael Pentella, Tanya Swanson, Institut de laboratoire d’État William A Hinton, Jamaïque Plain, MA, Larry Madoff, MD, Cheryl Gauthier MA Département de santé publique du Massachusetts, Boston, MA; Patricia Costa L’hôpital Miriam, Providence, Rhode Island; Cynthia Vanner, Toby Bennett, Dr Utpala Bandy, MPH Département de la Santé du Rhode Island, Providence, RI; Jennifer Rakeman, Ph.D., Laboratoire de santé publique de New York, Département de la santé et de l’hygiène mentale, New York, NY; Sean Cloonan MD École de médecine de l’Université de New York, Centre hospitalier de Bellevue, New York, NY; Les opinions exprimées sont celles des auteurs et ne représentent pas nécessairement la position officielle des Centres de contrôle et de prévention des maladies Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués