La cryptosporidiose infantile est associée à une réponse inflammatoire systémique persistante

La cryptosporidiose chez les jeunes enfants provoque une inflammation locale dans le tractus intestinal Nous avons étudié une cohorte de jeunes enfants atteints de cryptosporidiose pour déterminer si des réactions inflammatoires systémiques surviennent et, le cas échéant, évaluer si l’inflammation persiste après l’infection. La cryptosporidiose était associée à une augmentation de l’interleukine et de la tumeur. Le taux de nécrose facteur-α par voie systémique, persistant quelques mois après l’enrôlement Le taux de nécrose tumorale α était élevé au moment de l’enrôlement, mais les taux élevés ne persistaient pas. L’aggravation de la malnutrition, en particulier le retard de croissance, était observée après l’infection. et le retard de croissance chez les enfants atteints de cryptosporidiose justifie une évaluation plus approfondie

Les sujets témoins sains étaient des enfants asymptomatiques sans problèmes médicaux connus, qui n’avaient pas eu de diarrhée depuis au moins des semaines avant l’enrôlement et qui présentaient des résultats négatifs à un examen des selles pour CryptosporidiumEpidémiologique, clinique et obstétricale. Les enfants atteints de diarrhée ont été traités selon le degré clinique de déshydratation Les soins de suivi ont été effectués jusqu’à ce que la diarrhée soit résolue et au besoin. L’étude a été approuvée par le comité d’examen l’Université du Vermont College of Medicine Burlington et par le Comité d’éthique du GHESKIODiya jours de durée a été considérée comme «aiguë» La diarrhée de – jours de durée a été définie comme «persistante», et la durée de la diarrhée a été définie comme «chronique». « Un épisode diarrhéique a été défini comme au moins lâche ools dans une période -h Les définitions cliniques de la déshydratation ont été utilisées, comme indiqué ailleurs Poids-pour-âge, taille-pour-âge et poids-pour-taille Les scores Z ont été calculés à l’aide du logiciel EpiInfo. Centres de contrôle et de prévention des maladies Les enfants ont été définis comme ayant un retard de croissance, un gaspillage ou une malnutrition générale si le score Z taille-âge, le score Z poids-taille ou le score Z poids-âge étaient respectivement Les écarts-types sont inférieurs à la moyenne de la population Un total de – mL de sang périphérique de chaque enfant a été obtenu et placé dans des tubes vacutainer sans trace, revêtus d’EDTA et héparinisés lors de l’enrôlement et lors des visites de suivi. La numération cellulaire différentielle, la numération cellulaire CD, le test ELISA VIH et la mesure du zinc ont été réalisés dans les laboratoires cliniques des centres GHESKIO de Port-au-Prince, Haïti et Fletcher Allen Health Care de Burlington, Vermont. Laboratoire du Dr WS Blaner à l’Université Columbia de New York, New York, comme décrit par ailleurs Des échantillons de selles pour le diagnostic de l’infection par des espèces de Cryptosporidium, des copathogènes parasitaires et bactériens et de la lactoferrine ont été Les infections dues aux espèces de Cryptosporidium ont été diagnostiquées si Ziehl-Nielsen modifiait la coloration acido-résistante en révélant des oocystes de coloration rose – d’un diamètre de μm observés par des examinateurs indépendants. Pour les cytokines du sang périphérique, PBMC isolés à partir de –mL échantillons de sang total, – × PBMCs / mL ont été ensemencés à × cellules / mL sur -plus de plaques en triple exemplaires puits témoins négatifs n’ont reçu aucun stimulant supplémentaire, les puits témoins positifs ont reçu la phytohémaglutinine mitogène PHA à ug / mL La suspension d’antigène de Cryptosporidium a été préparée par ultrasonification d’oocystes, comme décrit ailleurs Les PBMC ont été incubées à ° C dans un incubateur de% CO pour h pour les puits de PHA, et les puits antigéniques ont reçu une suspension d’antigène Cryptosporidium à ug / mL. et pendant des jours pour les puits témoins et antigéniques. Les surnageants cellulaires ont été dilués dans du RPMI contenant du sérum bovin fœtal% et de la pénicilline-streptomycine non diluée ou non. les surnageants dilués ont été analysés pour le récepteur humain IL-, IL-, IL-, IFN-y et TNF-a par ELISA, conformément aux instructions du fabricant des kits ELISA Quantikine; Pour les cytokines fécales, les cytokines dans les surnageants des aliquotes de selles ont été mesurées, comme décrit ailleurs Les données ont été analysées avec le logiciel SAS, version SAS La signification statistique des variables normalement distribuées a été évaluée par Test γ ou test exact de Fisher pour les variables catégorielles et test t de Student pour les variables continues Le test de Kruskal-Wallis a été utilisé pour les variables non paramétriques Les valeurs de base ont été soustraites des valeurs post-stimulantes pour obtenir les résultats finaux. Résultats d’un test à queue Un total d’enfants avec cas de cryptosporidiose et d’enfants sans problèmes médicaux ou sujets témoins de diarrhée ont été inclus dans l’étude après obtention du consentement éclairé. Un total de cas et de sujets témoins est retourné – mois après l’enrôlement pour un minimum de suivi Les données démographiques sur l’âge et le sexe La plupart des enfants ont reçu un peu d’allaitement, mais la durée de l’allaitement maternel exclusif définie comme aucun autre apport oral était courte pour les deux groupes durée moyenne, mois pour les patients par rapport aux mois pour les sujets témoins La majorité des enfants présentant une cryptosporidiose présentaient une évaluation aiguë % ou diarrhée persistante% quelques jours après le début de la diarrhée, et la durée moyenne globale de la diarrhée cryptosporidienne a été prolongée jours Bien que% des patients aient reçu une solution de réhydratation orale avant la présentation,% présentaient une déshydratation modérée ou sévère

Caractéristiques des enfants symptomatiques présentant des cas de cryptosporidiose et des enfants sans sujets diarrhéiquesDispositions démographiques des enfants symptomatiques présentant des cas de cryptosporidiose et des enfants sans sujets diarrhéiques Les patients étaient plus malnutris que les sujets témoins au moment de l’inscription en ce qui concerne l’émaciation P = et la malnutrition générale P = Les patients étaient significativement plus retardés que les sujets témoins plusieurs mois après l’inscription P = et mois après l’inscription P & lt; La malnutrition générale était constamment plus élevée chez les patients que chez les sujets témoins aux visites de suivi de mois et de mois P = et P =, respectivement. En revanche, dépérissement constaté à l’inscription P = stabilisé ou amélioré chez les patients à la visite de -mois P = et ne différait pas de celle trouvée chez les sujets témoins à la visite de mois P = Dans le groupe témoin, aucun changement statistiquement significatif de la malnutrition n’a été démontré pendant la même périodeLes données de laboratoire étaient similaires entre les groupes données non représentées Non statistiquement significatives On a trouvé des différences à tout moment pour les mesures du nombre de globules blancs, du nombre de cellules CD, des résultats des tests d’anticorps anti-VIH, de l’hématocrite, du MCV et des copathogènes bactériens. plus de cas de carence modérée ou grave en vitamine A & lt; μg / mL par rapport aux témoins à l’inscription P = et à la visite de suivi au mois P = Le nombre de copathogènes parasitaires était plus élevé chez les patients quelques mois après l’inscription P =, en particulier pour Giardia lamblia P = Deux cas d’infection dus à Des espèces de Salmonella nontyphi ont également été détectées chez les patients. Parmi les patients,% des échantillons étaient positifs pour la lactoferrine fécale, alors que seuls les sujets témoins présentaient des échantillons positifs pour la lactoferrine fécale P & lt; P = ELISA pour les cytokines surnageantes PBMC a démontré que, en réponse à des PHA non spécifiques et des antigènes spécifiques au Cryptosporidium sonicate, les enfants atteints de cryptosporidiose présentaient une carence modérée ou sévère en vitamine A avait augmenté la production de cytokines systémiques, par rapport aux sujets témoins; quelques différences ont atteint une signification statistique. La production d’IL par les patients était significativement augmentée par rapport à la production chez les sujets témoins, à l’inclusion PHA et à mois. La production de sonate de Cryptosporidium et de PHA TNF-α augmentait significativement aux deux antigènes avec des sujets témoins La production d’IFN-γ, bien que plus élevée chez les patients, n’a pas atteint le seuil de signification statistique Aucune différence entre les patients et les sujets témoins n’a été trouvée pour les données IL- ou IL- non montrées

Changements dans la production de cytokines après que les PBMC ont été stimulées par la suspension d’antigène de Cryptosporidium ou par la phytohémaglutinine mitogène PHA chez des enfants avec des cas d’infection à Cryptosporidium et des enfants sans sujets diarrhéiques témoins au bout de mois, mois, mois, mois, mois, et mois après l’enrobage La mesure des cytokines fécales a montré une augmentation significative du TNF-α lors de l’enrôlement chez les patients, par rapport aux sujets témoins, qui n’ont pas persisté au bout de plusieurs mois. Les sujets témoins présentaient des taux d’IFN-γ fécaux statistiquement plus élevés après l’inclusion Aucune différence de cytokines fécales en IL-, IL-, facteur de croissance tumorale-β ou IL- n’a été notée entre les groupes. Discussion Nous démontrons que l’inflammation de la muqueuse systémique et intestinale, mesurée par les cytokines pro-inflammatoires TNF-α et IL-, est augmentée chez les très jeunes enfants atteints de cryptosporidiose, par rapport à Chez des sujets témoins, la production de cytokines pro-inflammatoires systémiques chez les patients était plus importante que chez les sujets témoins. Pour des raisons non claires, ces différences ont atteint une signification statistique et ont été les plus marquées après l’infection par Cryptosporidium. Nous avons également constaté que ces taux élevés persistaient. L’association de la cryptosporidiose à la malnutrition, en particulier le retard de croissance et la carence en vitamine A, a également été confirmée pour cette population. Nos données devront être étendues et confirmées par des méthodes immunologiques supplémentaires. et une plus grande population étudiée, ils suggèrent qu’une inflammation systémique persistante, quoique subtile, peut nuire à la santé d’un jeune enfant infecté par des espèces de Cryptosporidium dans un pays en développement. Les cytokines inflammatoires attirent les leucocytes dans le tractus intestinal, contribuant aux manifestations cliniques de la crypte diarrhée osporidiale IL- et TNF-α ont été étudiés dans les lignées animales et cellulaires et dans les modèles de xénogreffe humaine, et ils sont constamment élevés en association avec les changements inflammatoires stimulés par l’infection Cryptosporidium Les lignées cellulaires intestinales humaines et les xénogreffes humaines démontrent ces cytokines directement à partir de la cellule épithéliale intestinale infectée par Cryptosporidium Sans surprise, la réponse IL à Cryptosporidium intracellulaire mais parasite extracytoplasmique de la cellule épithéliale intestinale est quantitativement plus faible que l’infection par des bactéries invasives ou Entamoeba histolyticaIn études humaines, nous et d’autres ont ont évalué le rôle des cytokines pro-inflammatoires et des chimiokines CXC dans la cryptosporidiose [,,,] Dans des études antérieures d’enfants haïtiens et symptomatiques symptomatiques, les niveaux de TNF-α et IL- étaient élevés dans les extraits fécaux au moment du diagnostic de cryptosporidiose. étude en cours, qui comprend un groupe de contrôle sain et non-diarrhéique, confirme les données in vitro et xénogreffe, ainsi que la production de TNF-α intestinal amélioré chez les patients. La cytokine inflammatoire systémique augmente et la persistance de l’inflammation n’a jamais été démontrée en association avec la cryptosporidiose infantile. Il est intrigant de considérer si une augmentation systémique légère et persistante et / ou les taux de cytokines pro-inflammatoires intestinales peuvent être associés à un retard de croissance linéaire, similaire à la population des maladies inflammatoires de l’intestin pédiatriques, dans lequel% des effets du retard de croissance sont attribués à la réponse inflammatoire. Le TNF-α, qui a des effets inhibiteurs sur l’axe de croissance par inhibition de la maturation des chromosomes des plaques de croissance Le TNF-α stimule également la résorption osseuse et inhibe la formation osseuse in vitro Notre étude présente plusieurs limites. petite taille de l’échantillon Surtout, l’histoire de l’enfant avant enro Le risque d’infection à Cryptosporidium ou d’autres infections entériques est inconnu, et quelques enfants diffèrent en ce qui concerne le statut sérologique. De nombreux enfants présentent une diarrhée persistante, ce qui rend difficile la comparaison des cytokines avec les données de nos études initiales et peut sous-estimer le degré. L’analyse du rôle de la génétique de l’hôte dans la production de cytokines pro-inflammatoires, en particulier chez les enfants souffrant d’un retard de croissance, améliorera également notre compréhension de l’inflammation de Cryptosporidium dans une cohorte de naissance. L’analyse directe du rôle de la cytokine inflammatoire systémique ou muqueuse augmente sur la croissance osseuse linéaire, la susceptibilité aux autres infections parasitaires et la carence en vitamines offrira un aperçu important de la réponse des enfants du monde en développement à la cryptosporidiose et autre en infections tériques

Remerciements

Nous remercions le personnel des Centres GHESKIO, en particulier les travailleurs de terrain Suzette Fleury et Adeline Bernard, ainsi que les enfants et les parents qui ont participé à l’étude. Soutien financier Les Instituts nationaux de la santé ROAI à CLS et l’Université du Vermont Nouvelle initiative de recherche à BDKPotentiel conflits d’intérêts Tous les auteurs: pas de conflits