Colonisation des pneumocystes chez les adultes plus âgés et rendement diagnostique de l’échantillonnage respiratoire non invasif simple versus apparié

La présence de Pneumocystis a été évaluée dans des échantillons de lavage oropharyngés de l’âge médian des adultes, années; âge – ans, dont un échantillon nasal apparié d’ADN de Pneumocystis jirovecii a été détecté en% des échantillons de lavage oropharyngés, et la fréquence a augmenté à% chez les spécimens appariés La colonisation par pneumocystis est fréquente chez les adultes plus âgés Un double échantillonnage non invasif augmente le rendement diagnostique

Les incidences trouvées dans différentes études de populations spécifiques varient grandement, et l’absence de méthodes standardisées entrave les comparaisons En outre, la sensibilité relative des différents spécimens pour diagnostiquer la colonisation avec d’autres pathogènes respiratoires a été rapportée à Varie selon l’âge Nous avons donc entrepris la présente étude pour décrire l’incidence de la colonisation par Pneumocystis chez les personnes âgées et comparer le rendement diagnostique des prélèvements nasaux et des prélèvements oropharyngés comme méthodes d’échantillonnage non invasif. Méthodes Personnes âgées participant à un programme de soins préventifs en ambulatoire La clinique d’Agustín Cruz Melo, Municipalité de Independencia, à Santiago du Chili, entre octobre et décembre, a été invitée à fournir des prélèvements nasaux et des prélèvements oropharyngés pour la détection de Pneumocystis jirovecii La Commission d’Ethique de la Zone Métropolitaine de Santé de Santiago a approuvé l’étude, et le consentement éclairé écrit était o Les patients étaient presque consécutifs et étaient inscrits à un rythme de – patients par jour ou par semaine pendant plusieurs mois, d’octobre à décembre. Un total de patients a été approché et a refusé de participer. Les critères d’inclusion étaient l’âge des années ou plus, capacité à fournir un consentement éclairé par écrit, et être capable d’activités normales pour l’âge Les patients étaient exclus s’ils présentaient une infection respiratoire aiguë, avaient eu une condition immunodéprimante au cours des années précédentes, par exemple, un cancer, ou souffraient de malnutrition ou avaient reçu des médicaments immunosuppresseurs pour une raison quelconque au cours des mois précédents, y compris des corticostéroïdes inhalés ou systémiques indépendamment de la dose et des antibiotiques pour des problèmes respiratoires ou du triméthoprime sulfaméthoxazole pour les mois précédents. examen des dossiers médicaux Les patients ont été contactés par téléphone – mois après l’échantillonnage; On ne pouvait pas joindre les patients par téléphone et on revoyait leurs dossiers médicaux pour écarter les spécimens d’écouvillonnage PCPNasal à l’aide d’un écouvillon de coton stérile, imbibé de solution saline, qui était inséré ~ cm dans une narine à angle oblique Les échantillons de lavage oropharyngés ont été obtenus en demandant au patient de se rincer la bouche et de se gargariser la gorge pendant min avec mL de solution saline stérile et en récupérant le liquide nasal. le liquide dans un tube à bouchon à vis Les échantillons collectés ont été transportés au laboratoire dans des boîtes isothermes contenant des emballages réfrigérés congelés. Les écouvillons nasaux ont été vigoureusement vortexés et centrifugés à min, et les échantillons de lavage oropharyngés ont été centrifugés à min Les surnageants ont été jetés et les culots ont été reconstitués en μL et stockés à-° C jusqu’au traitement. Ils ont été examinés individuellement. L’ADN de Qiagen Pneumocystis a été identifié par une procédure de PCR nichée en utilisant les amorces oligonucléotidiques pAZ-E et pAZ-H qui ont été conçues pour le gène codant l’ARNr de la grande sous-unité mitochondriale de Pneumocystis et qui amplifient tous les Pneumocystis. Espèces et amorces internes pAZ-X et pAZ-Y qui sont spécifiques de P jirovecii, comme décrit ailleurs Des contrôles internes pneumocystis-négatifs et humains-β-globine ont été inclus avec chaque échantillon, pour surveiller la contamination croisée et l’ADN. Les tests ont été réalisés en double, avec des détails cliniques. Le logiciel statistique Stata, version StataCorp, a été utilisé pour comparer les taux de colonisation de Pneumocystis détectés par chaque méthode d’échantillonnage seule ou en combinaison chez tous les participants et chez tous les participants. dans des sous-groupes d’individus & lt; et ⩾ ans, par le test d’association Differ Différences pour lesquelles P & lt; ont été considérés comme significatifs Résultats Un total d’adultes âge médian; Les échantillons de lavage oropharyngés n’étaient pas évaluables et les premiers échantillons consécutifs d’écouvillonnage nasal ont été jetés avant l’analyse parce que la procédure de collecte des écouvillons a été modifiée pour éviter le nasopharynx. jirovecii ADN a été détecté en% des échantillons de lavage oropharyngés, en% des échantillons nasaux sur écouvillon, et en% des échantillons de lavage oropharyngien et nasal appariés Figure Aucun résultat positif coïncident ont été détectés dans les échantillons appariés Par comparaison par groupe d’âge, l’ADN de P jirovecii a été détecté en% des échantillons de lavage oropharyngés et en% des échantillons prélevés par écouvillonnage nasal chez des individus & lt; des années et des% des prélèvements de lavage oropharyngés et% des prélèvements nasaux par écouvillonnage de ceux ⩾ ans P⩾ La combinaison des résultats a augmenté le rendement diagnostique à% de et à% de, respectivement

rgeTélécharger slidePneumocystis colonisation chez les adultes plus âgés, comme détecté par amplification en chaîne par polymérase ARN amplification de l’ADN dans les échantillons NS nasale, lavage oropharyngien OW, et les deux échantillons résultats combinés Les appels téléphoniques et l’examen des dossiers médicaux n’ont révélé aucun cas de PCP dans l’année d’échantillonnage. démontre que les personnes âgées non immunosupprimées sont fréquemment colonisées par Pneumocystis, ce qui suggère qu’elles participent au cycle de transmission de P jirovecii comme réservoir de cette infection chez les personnes immunodéprimées. La signification clinique de cette constatation n’a pas été établie. Aucun des participants n’a développé de PCP. L’incidence de colonisation détectée par amplification par PCR nichée de l’ADN amplifié d’échantillons uniques non invasifs dans cette étude% pour les échantillons de lavage oropharyngés et% pour les échantillons nasaux sur écouvillon est comparable à l’incidence récemment rapportée par Spencer et al pour oropharynge simple Les échantillons de lavage de jeunes adultes dans la communauté sont inférieurs à ceux observés par Medrano et al chez les agents de santé administratifs plus jeunes testés avec des échantillons de lavage oropharyngés. Les participants à la présente étude ont suivi un programme de santé préventive pour les personnes âgées en ambulatoire. réglage; Ils étaient en bonne santé et n’avaient pas de symptômes respiratoires avant ou au moment de l’échantillonnage. L’âge croissant a été associé à la colonisation par Pneumocystis, et les adultes plus âgés sans immunodépression peuvent avoir une diminution des réponses immunitaires cellulaires lymphocytaires T, prédisposant à la colonisation par Pneumocystis [, ] Cependant, une augmentation de l’incidence de Pneumocystis n’a pas été documentée chez les participants de la présente étude relativement aux incidences signalées chez les jeunes adultes. Plus intéressant encore, l’appariement des échantillons a presque doublé le rendement de détection de l’ADN de P. jirovecii. manque d’une méthode de culture microbiologique pour Pneumocystis, la quantité d’échantillon est critique pour le diagnostic des états de colonisation dans lesquels la charge des organismes Pneumocystis est minime Quantification des copies de Pneumocystis par PCR en temps réel normalisée sur la base du nombre de copies du génome humain s’est avérée utile pour comparer la charge de Pneumocystis dans des échantillons de lavage broncho-alvéolaire obtenus pour le diagnostic de PCP La normalisation sur la base de l’ADN humain peut-elle être applicable pour établir une quantité minimale de spécimens requis pour un prélèvement non invasif chez des individus immunocompétents? Figure, comme cela a été suggéré pour d’autres agents pathogènes Les prélèvements nasaux sur écouvillon étaient moins sensibles chez les individus ⩾ ans, peut-être à cause de la pauvreté généralisée. On n’a pas trouvé de résultats positifs concomitants pour l’ADN de P jirovecii aux sites d’échantillonnage nasal et buccal, ce qui indique qu’environ la moitié des individus colonisés par Pneumocystis auraient été oubliés si seulement des spécimens avaient été étudiés résultats d’échantillonnage de & gt; site peut fournir un diagnostic plus précis de la colonisation En outre, l’échantillonnage combiné ou mixte peut être rentable comme stratégie pour augmenter le rendement des tests chez les sujets asymptomatiques, comme cela a été proposé pour d’autres agents pathogènes respiratoires de Streptococcus pneumoniae et d’Haemophilus influenzae, qui peuvent révéler des incidences différentes de colonisation à différents sites dans les voies respiratoires supérieures, suggérant que différentes niches anatomiques des voies aériennes supérieures pourraient devoir être échantillonnées pour augmenter le rendement de la détection de la colonisation par P jirovecii Le manque d’accord sur les résultats positifs pour Pneumocystis entre différents types d’échantillons dans cette population peut ne pas être universel pour les infections à Pneumocystis; par exemple, la PCP chez les personnes gravement immunodéprimées avec des charges de Pneumocystis caractéristiquement plus élevées est facilement diagnostiquée par des méthodes moins sensibles, telles que l’analyse microscopique ou le RCRIn simple-rond, la colonisation des voies respiratoires supérieures par P. jirovecii est fréquente chez les adultes sains plus âgés. La détection de l’ADN de P jirovecii dans les échantillons de lavage oropharyngés ne permet pas de prédire les résultats des prélèvements nasaux et vice versa, indiquant que la colonisation des voies respiratoires supérieures par P jirovecii peut avoir des niches différentes. le rendement diagnostique, ce qui suggère que le mélange des échantillons avant l’extraction de l’ADN peut être une stratégie rentable pour augmenter la précision diagnostique de la pneumonie des Pneumocystis des voies respiratoires supérieures

Remerciements

Nous remercions Dr Hugo Amigo Université du Chili École de santé publique pour l’analyse statistique Soutien financier Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico FONDECYT, Santiago, Chili subvention de recherche à SLVPotentiel de conflits d’intérêts Tous les auteurs: pas de conflits